上海信帆提供促激素（TSH）放免實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)

通用名：碘[125I]人促激素放射免疫分析藥盒
漢語拼音：Dian [125I] Rencujiazhuangxianjisu Fangshemianyifenxi Yaohe
英文名：Iodine [125I] Human Thyroid Stimulating Hormone Radioimmunoassay Kit
[使用目的]
用于人血清樣本中促激素(TSH)的定量測(cè)定
[試驗(yàn)原理]
促激素（TSH）是含211 個(gè)氨基酸的糖蛋白類激素，分子量約為28,000D，由α
和β兩個(gè)亞基組成。TSH 主要受下丘腦分泌的促激素釋放激素（TRH）和血液中游離
的激素（T3、T4）的調(diào)節(jié)。TRH 可促進(jìn)TSH 的分泌，T3、T4 對(duì)TSH 的分泌起負(fù)反饋
調(diào)節(jié)作用。另外，下丘腦分泌的生長激素釋放抑制激素（SS）和腎上腺皮質(zhì)分泌的糖皮質(zhì)
激素可降低TSH 的分泌，而雌激素可增加其分泌。
本品采用了第二抗體＋聚已二醇沉淀法放射免疫分析試驗(yàn)原理：含促激素(TSH)的樣
品和125I 標(biāo)記的促激素(TSH)與相應(yīng)的抗體反應(yīng)形成抗原抗體復(fù)合物。反應(yīng)后加入二
抗及PEG，使免疫復(fù)合物沉淀，離心，測(cè)沉淀放射性計(jì)數(shù)。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線得到樣本中促甲
狀腺激素(TSH)的濃度。
[試劑主要組成成分]
1.TSH 標(biāo)準(zhǔn)品：
一套共6 瓶，以不含TSH 的人血清為基質(zhì)，用時(shí)輕輕搖勻，需冷存。
TSH 標(biāo)準(zhǔn)品濃度：
A B C D E F （單位）
0 1 5 10 25 50 μIU/mL
2.質(zhì)控品：二瓶，1.0ml／瓶，-20℃凍存（2-8℃保存六周）。。
3.抗TSH 血清： 綠色溶液，需2-8℃冷存。
4.125I-TSH： 紅色溶液，需2-8℃冷存。
5.分離劑： 藍(lán)色溶液，充分搖勻后使用，需2-8℃冷存。
[儀器]
1、γ－計(jì)數(shù)器
2、低溫離心機(jī)
3、恒溫水浴箱
[樣本要求]
110 微升人血清樣本。
采靜脈血5ml 于塑料試管中，靜置使其凝固后，1500 轉(zhuǎn)／分離心，取其上清液，放置玻
璃瓶中。如果樣本不立即使用，可在-18℃~-25℃儲(chǔ)存6 個(gè)月。
嚴(yán)重溶血、高濃度的脂類、膽紅素對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。
[實(shí)驗(yàn)方法]
操作方法I：
1、將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少30 分鐘以上才可進(jìn)行操作；
2、取60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào)，所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù)；
3、取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本200μl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中；
4、除T、NSB 管外，每管均各加入200μl 抗體工作液，充分混勻；
5、37℃溫育1.5 小時(shí)；
6、每管均各加入200μl 標(biāo)記物工作液，充分混勻；
7、37℃溫育1 小時(shí)；
8、每管均各加入500μl 分離劑后，充分混勻；
9、離心3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液；
10、用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定每管1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)；
11、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。
操作方法Ⅰ (OperationⅠ)： （單位μL）
T
NSB 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和人樣品
A（B0） B C D E F L H 1 2 3 …..
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
A 200 200
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
B－F 200 200 200 200 200
質(zhì)控品和樣品200 200 200 200 200 ….
抗TSH 血清
混勻，置37℃水浴溫育90 分鐘
125I-TSH
混勻，置37℃水浴溫育60 分鐘
分離劑500
搖勻，3000RPM 離心20 分鐘（溫度低于25℃）
吸去上清液
沉淀物計(jì)數(shù)1 分鐘
操作方法II：
1、將實(shí)驗(yàn)所需試劑及樣本放置室溫，平衡至少30 分鐘以上才可進(jìn)行操作；
2、取60X12mm 聚苯乙烯管進(jìn)行編號(hào)，所有實(shí)驗(yàn)均做雙管重復(fù)；
3、取每個(gè)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控血清和樣本200μl 加入相應(yīng)編號(hào)的試管中；
4、每管均各加入200μl 標(biāo)記物工作液；
200
200
5、除T、NSB 管外，每管均各加入200μl 抗體工作液，充分混勻；
6、室溫（20～25℃）放置12~16 小時(shí)；
7、每管均各加入500μl 分離劑后，充分混勻；
8、離心3500 轉(zhuǎn)／分，20 分鐘后，吸去或傾倒掉上清液；
9、用γ-計(jì)數(shù)器測(cè)定每管1 分鐘的放射性強(qiáng)度計(jì)數(shù)；
10、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取樣本及質(zhì)控血清的濃度。
操作方法Ⅱ： （單位μL）
T
NSB 標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控品和人樣品
A（B0） B C D E F L H 1 2 3 …..
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
A 200 200
標(biāo)準(zhǔn)品(STD)
B－F 200 200 200 200 200
質(zhì)控品和樣品200 200 200 200 200 ….
抗TSH 血清
125I-TSH
混勻,室溫放置12~16 小時(shí)
分離劑500
搖勻，3000RPM 離心20 分鐘（溫度低于25℃）
吸去上清液
沉淀物計(jì)數(shù)1 分鐘
[實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意]
1、γ-計(jì)數(shù)器本底計(jì)數(shù)應(yīng)≤100CPM/分，效率應(yīng)≥75％；
2、加入放射性標(biāo)記物時(shí)，應(yīng)做好防護(hù)、小心謹(jǐn)慎，以避免造成放射性污染；
3、如果某一個(gè)樣本的測(cè)定值高于濃度的標(biāo)準(zhǔn)品濃度，用零標(biāo)準(zhǔn)品以1：2 或1：
4 的比例稀釋樣本后重新測(cè)試，測(cè)試結(jié)果乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
[質(zhì)量控制]
每次實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)至少采用兩個(gè)濃度的質(zhì)控血清進(jìn)行質(zhì)量控制，以確保每次實(shí)驗(yàn)測(cè)定結(jié)果
的可靠性。
1、質(zhì)控血清的平均值應(yīng)在允許范圍內(nèi)；
2、曲線方程應(yīng)采用擬合方式；
3、重復(fù)樣本的測(cè)定結(jié)果相差在15％以內(nèi)。
如不能同時(shí)滿足以上條件，則此次試驗(yàn)結(jié)果無效，全部試驗(yàn)需重新進(jìn)行。
[測(cè)定結(jié)果的計(jì)算]
200
200
1、計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)品（B~G）、質(zhì)控品和樣品與標(biāo)準(zhǔn)品A 的比值（B/B0）;
2、劑量-反應(yīng)曲線按“對(duì)數(shù)劑量-結(jié)合率對(duì)數(shù)”（Log(dose-Log(B/Bmax))數(shù)學(xué)模型或
四參數(shù)數(shù)學(xué)模型擬合，通過每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品的B/B0 和其濃度建立標(biāo)準(zhǔn)曲線；
3、從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出樣本的濃度值，B/B0 不在標(biāo)準(zhǔn)曲線之內(nèi)的樣本及其濃度
[實(shí)驗(yàn)的局限性]
1、本品僅供體外診斷使用，只能用于人血清樣本的測(cè)定而不能用于其他體液樣本；
2、通過其它方法得到的TSH 值與本品測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性；
[產(chǎn)品性能指標(biāo)]
1、靈敏度：
取藥盒中校準(zhǔn)試劑A 點(diǎn)（0 劑量）作10 平行管，求其均值X 及偏差SD，從劑量—反應(yīng)
曲線上查出與X+2SD 相對(duì)應(yīng)的劑量值，確定為本藥盒的靈敏度（小檢出值），為0.25
μIU/mL。
2、精密度：
精密度是質(zhì)量控制的基本參數(shù)，用批內(nèi)變異系數(shù)和批間變異系數(shù)確定。要求批內(nèi)變異系
數(shù)< 10% ，批間變異系數(shù)< 15% 。
批內(nèi)變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品C1、C2、C3 同時(shí)分別進(jìn)行多個(gè)復(fù)管一次測(cè)定中
的重復(fù)性，應(yīng)小于10%。
C1 C2 C3
批內(nèi)變異系數(shù)7.56% 5.34% 5.19%
批內(nèi)變異系數(shù)均小于10%。
批間變異系數(shù):指不同濃度的三個(gè)樣品C1、C2、C3 在多次測(cè)定間的重復(fù)性，應(yīng)小于15%。
C1 C2 C3
批間變異系數(shù)10.38% 9.35% 5.71%
批間變異系數(shù)均小于15%。
3、測(cè)定范圍：
采用零標(biāo)準(zhǔn)品添加高濃度的TSH,確定本試劑盒的測(cè)定范圍為0 ～ 50.0μIU/mL
[注意事項(xiàng)]
1、全部試劑應(yīng)避光貯于2-8℃并在使用前應(yīng)在室溫下（17-27℃）平衡。
2、該產(chǎn)品在制備過程中所用的血清均經(jīng)檢測(cè)，他們對(duì)HBsAg、HIV 無反應(yīng)。但即使這樣也
不會(huì)保證對(duì)所有的傳染性因素進(jìn)行檢測(cè)。由于沒有一個(gè)明確的測(cè)試方法能*保證不會(huì)出現(xiàn)
HBsAg、HIV 或其他傳染病毒，所以所有的產(chǎn)品包括來自人體的物質(zhì)都應(yīng)按良好的實(shí)驗(yàn)室規(guī)
B/B0×100 = 標(biāo)準(zhǔn)或樣品(STD or Samples)(CPM)—NSB(CPM)
A 標(biāo)準(zhǔn)(STD)(CPM)—NSB(CPM)
×100
范，按疾病預(yù)防和控制中心的有關(guān)規(guī)定要求進(jìn)行預(yù)防。
3、樣本濃度過高，在分析前用保溫液稀釋，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。
4、血清正常值，僅供參考，使用單位應(yīng)建立自己實(shí)驗(yàn)室的正常值。
正常血清參考值0～10 μIU/mL
5、本藥盒標(biāo)準(zhǔn)品濃度用國家標(biāo)準(zhǔn)（衛(wèi)生部生物制品檢定所提供標(biāo)準(zhǔn)80/558）標(biāo)定需乘
以系數(shù)2.3
[規(guī)格] 100 人份／盒
[儲(chǔ)藏]冷凍組份-20℃,冷藏組份2～8℃。
[有效期] 1 個(gè)月

上海信帆提供促激素（TSH）放免實(shí)驗(yàn)代測(cè)服務(wù)